Auf Befehl Gottes muss Abraham seinen Sohn Isaak opfern. In dieser Prüfung beweist Abraham durch Gehorsam seinen Glauben und seine Größe, das Opfer selbst wird durch Gott verhindert (Gen. 22). Der Gekreuzigte in den Händen Gottvaters verweist auf die Bedeutung der Opferung Isaaks als alttestamentarisches Vorbild für den Opfertod Christi. Demzufolge wird Isaak mit dem Holzbündel typologisch auf die Kreuztragung Christi, der gebundene Isaak auf die Fesselung Christi bei der Kreuzigung bezogen (Victor H. Elbern: Abraham. In: Lexikon für Theologie und Kirche, Bd. 1. Freiburg 1957, Sp. 56-59, hier Sp. 61). Der Widder verweist auf die Ablösung des Menschenopfers durch das Tieropfer (Die Religion in Geschichte und Gegenwart. Handwörterbuch für Theologie und Religionswissenschaft, Bd. 4. Tübingen 1960, S. 867-868). Die für das Abendland typische Dramatisierung der Opferszene (LCI 1, 1968, S. 27) wird durch übertrieben wirkende Gesten und Verdrehungen der Figuren gesteigert, wobei Schwierigkeiten mit den Proportionen und mit perspektivischen Verkürzungen deutlich werden. Die Hauptszene verdrängt die Nebenszenen in den Hintergrund. Landschafts- und Architekturdarstellung stehen in der manieristischen Tradition, die Stadt im Hintergrund weist phantastische Großarchitekturen auf.