Die Geschichte von Amor und Psyche erfreute sich am Prager Hof als Sinnbild einer vollendeten, in der Unsterblichkeit gipfelnden Liebe besonderer Beliebtheit. In seinem ambitionierten, großformatigen Gemälde wählte der Prager Hofmaler Joseph Heintz jedoch keine jener seit Raffael gerne dargestellten glücksvollen Episoden wie die Himmelfahrt oder Vermählung von Psyche, sondern den dramatisch aufgeladenen Moment des ersten Erkennens des wahren Geliebten und seines damit verbundenen schmerzvollen Verlusts. Der schönen Königstochter wurde die Neugierde zum Verhängnis, doch endlich ihrem nächtlichen Liebhaber in die Augen zu blicken, dessen Liebe sie sich nachts erfreute, ohne ihn sehen und erkennen zu dürfen. Sie entzündete eine Öllampe und erblickte Amor, den sie durch einen Tropfen heißes Öl jedoch weckte. Amor entfloh zur Strafe, und Psyche konnte erst nach vielen leidvollen Prüfungen wieder mit ihm zusammenkommen. Heintz zeigt den dramatischen Höhepunkt der nächtlichen Szene, als Amor im flackernd unruhigen Zwielicht der von Psyche entzündeten Öllampe entflieht. Psyche präsentiert sich dem Betrachter in kompliziert verdrehter Pose als Rückenakt auf ihrem nächtlichen Lager. Die Begegnung der beiden Liebenden wird durch das Spiel der beiden Eroten im Vordergrund und den beiden schnäbelnden Tauben zwischen ihren Beinen variiert. Einer der beiden Eroten blickt verschmitzt zum Betrachter und bezieht ihn in das Bildgeschehen ein. Dieses Spiel auf verschiedenen Ebenen verleiht dem Gemälde neben den anspruchsvollen Posen der nackten Körper, der ausgeklügelten Beleuchtung und dem artifiziellen Effekt des perlmuttfarbenen Schimmers von Psyches weißer Haut besondere Sinnlichkeit und Raffinesse. Darüber hinaus bot das komplex arrangierte Gemälde dem gelehrten Kenner einen weiteren Genuss, indem es auf damals bekannte Kunstwerke zurückgriff. So zitierte Joseph Heintz mit dem Rückenakt antike Vorbilder beziehungsweise Raffaels Ausmalung der Loggia di Psiche in der Villa Farnesina in Rom mit vergleichbar dynamisch verdrehten Rückenakten. Auch bei der Darstellung der beiden Eroten im Vordergrund handelt es sich um ein offenbar bewusstes, auf Wiedererkennung zielendes Zitat eines Vorbilds, nämlich Parmigianinos Bild des bogenschnitzenden Amor, das sich seit 1603 im Besitz Rudolfs II. befand. In der raffiniert dramatischen und sinnlichen Inszenierung eines der attraktivsten Stoffe der Antike ist das Gemälde von Joseph Heintz ein herausragendes Beispiel für die Malerei des Prager Manierismus.